RNA Pulldown、DNA Pull-down

產(chǎn)品型號：

所屬分類(lèi)：免疫學(xué)實(shí)驗

產(chǎn)品時(shí)間：2023-07-26

簡(jiǎn)要描述：RNA Pulldown、DNA Pull-down
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RNA Pulldown、DNA Pull-down

實(shí)驗意義：

核酸與蛋白質(zhì)的互作是細胞功能的核心，包括蛋白質(zhì)合成、mRNA組裝等生命活動(dòng)中重要的代謝過(guò)程，研究核酸與蛋白質(zhì)的互作是研究生命科學(xué)的基本工具。

實(shí)驗原理及步驟

RNA Pull-down:通過(guò)體外轉錄RNA并用生物素進(jìn)行標記，然后與胞漿蛋白混合物共同孵育形成RNA-蛋白質(zhì)復合物，然后用鏈委親和素標記的磁珠分離純化該復合物(利用生物素與鏈霉親和素的非共價(jià)親和作用)。洗脫后進(jìn)行檢測，如果檢測蛋白為已知蛋白可通過(guò)WB進(jìn)行鑒定，如果檢測未知蛋白則可以結合質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。流程為提取細胞胞漿蛋白樣品液- -體外轉錄合成生物素標記RNA-共孵育_ -磁珠純化- -洗脫得到互作蛋白. -WB或質(zhì)譜鑒定。

DNA Pull-down:通過(guò)合成標記有生物素的DNA+*片段，與細胞核蛋白混合物共同孵育形成DNA-蛋白質(zhì)復合物，然后用鏈垂親和素磁珠純化，WB或者質(zhì)譜進(jìn)行檢測鑒定。流程為提取核蛋白樣品液- -合成生物素標記DNA-共孵育- -磁珠純化- ~洗脫得到互作蛋白- -WB或質(zhì)譜鑒定。

結果展示

RNA Pull-down

DNA Pull-down .

實(shí)驗周期及交付標準

1.實(shí)驗周期: 1-2個(gè)月

2.交付標準:

RNA Pull-down:探針序列、X光片.實(shí)驗報告(實(shí)驗步驟、試劑、儀器等)

DNA Pull-down:探針序列、X光片.實(shí)驗報告(實(shí)驗步驟.試劑、儀器等)

需確認信息

1.目的基因種屬及ID號

2.基因序列信息

3.樣本種屬及類(lèi)型

4.樣本數量.

5.分析要求

參考文獻

[1]Chen R,Liu Y，Zhuang H，et al. Quantitative proteomics reveals that long non-coding RNA MAL AT1 interacts withDBC1 to regulate p53 acetylation[J]. Nucleic Acids Research, 2017, 45(17):9947-9959.

[2]Tran D H , Shishido Y，Chung S P , et al. lnentication of DNA-binding proteins that interact with the 5-f1anking regionof the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis andmass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 2015, 116:94-100.

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