單克隆抗體制備服務(wù)

產(chǎn)品型號：

所屬分類(lèi)：免疫學(xué)實(shí)驗

產(chǎn)品時(shí)間：2023-07-26

簡(jiǎn)要描述：?jiǎn)慰寺】贵w制備服務(wù)
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提供商:    上海研謹生物

服務(wù)名稱(chēng):        單克隆抗體制備服務(wù)

規格:               實(shí)驗服務(wù) 

單克隆抗體(MAb)是針專(zhuān)- -的抗原決定簇產(chǎn)生的抗體，單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年，由G. KOhler和Milstein創(chuàng )立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產(chǎn)抗體。

雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗是針對體的主要步驟包括:

(1 )抗原制備，

(2)免疫動(dòng)物,

(3)免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的制備,

(4)細胞融合;

(5)雜交瘤細胞的選擇培養，

(6)雜交瘤細胞的篩選;

(7)雜交瘤細胞的克隆化;

(8)單克隆抗體的檢定;

(9)分泌單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立:

(10)單克隆抗體的大量制備。

下面簡(jiǎn)要介紹單克隆抗體的制備過(guò)程:

1、免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的過(guò)程。一般選用6- 8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射?？乖ㄟ^(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。

2、細胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合, 并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細胞。

3、選擇性培養選擇性培養的目的是篩選融臺的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養基。 在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。未融臺的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長(cháng)期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得 了次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉移酶，并具有骨髓瘤細胞能無(wú)限增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。

4、雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化在HAT培養基中生長(cháng)的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細胞的克隆化培養。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細胞，并進(jìn)行克隆擴增。

經(jīng)過(guò)全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類(lèi)型、亞類(lèi)、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子后，及時(shí)進(jìn)行凍存。

5、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動(dòng)物體內誘生法和體外培養法。

(1)體內誘生法取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0. 5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預處理。1-2周后，腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見(jiàn)小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

(2)體外培養法將雜交瘤細胞置于培養瓶中進(jìn)行培養。在培養過(guò)程中，雜交瘤細胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。近年來(lái),各種新型培養技術(shù)和裝置不斷出現，大大提高了抗體的生產(chǎn)量。雜交瘤細胞融合后，要進(jìn)行篩選后才能使用。雜交瘤細胞分為兩次:一、篩選出雜交瘤細胞;二、 在初選的雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，這兩次篩選的方法和原理各不相同。

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